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(2008-12-04 07:23);  ޸:2008-12-04 07:23; 
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增生性玻璃体视网膜病变炎性细胞增殖过程的实验研究

眼研究 2000年第4期第18? 实验研究

作?:唐庆新??吴雅臻??张晓?

单位?130041 长春,白求恩医大学第二临床学院眼

关键词:增生性玻璃体视网膜病变;细胞;增殖;视网膜脱?

??摘覠 目的观察实验性增生?玻璃体视网膜病?(PVR)形成过程中炎性细胞的增殖过程。方法?过眼球穿孔伤和玻璃体内注入自家?诱发大鼠PVR模型,分别在处理后第1?3?7?14?21?28天取模型眼行细胞学和免疫组化方法?测玻璃体和覹网膜的增殖细胞?结果炎症反应在处理后第1天就?始,细胞增殖在第7天达高峰?14天后以单核细胞,淋巴细胞和成纤维细胞增殖为主。后期玻璃体纤维化,视网膜脱离,结构不清。结论实验?VR形成过程中,炎?细胞的增殖规律与创伤后伤口愈合过程相一致??

??分类??R?774

Studies on the proliferative course of inflammatory cells in experimental PVR

Tang Qingxin?Wu Yazhen?Zhang Xiaoguang

??(Department of Ophthalmology,Second Clinical College,Norman Bethune University of Medical Science,Changchun 130041.)

??Abstract ?ObjectiveTo observe the proliferative course of inflammatory cells during the development of experimental proliferative vitreoretinopathy (PVR).MethodsRat PVR models were induced by penetrating injury of eye balls and blood was injected into vitreous,the model eyes were removed at different periods.Cytomorphological examination was taken and immunohistochemical method was used for quantitative determination of proliferative cells on vitreous and retina.ResultsThe inflammatny reaction began on d 1 after treatment and cell proliferation reached a peak on d 7.After d 14,monolytes,lymphocytes and fibrocytes gradually increased.Vitreous fibrosis and retinal detachment or breakage were found on d 28.ConclusionThe proliferative course of inflammatory cells during the development of experimental PVR is corresponding to the process of the healing course after trauma?

??Key words?proliferative vitreoretinopathy cell proliferation retinal detachment?

??增生性玻璃体视网膜病?(Proliferative vitreoretinopathy,PVR)是孔源?覹网膜脱a和A伤后由于玻璃体及视网膜表面的细胞增殖和收缩,造成牵引性覹网膜脱a的病变,也是导致视网膜脱离手术失败的主覠原因。大量研究已经阐述了PVR膜中的细胞来源,其基本的病理过程就是视网膜色素上?(Pigmented retinal epithelial PRE)细胞和T经胶质细胞向炎?细胞转化,在覹网膜表面和玻璃体内游走?附?、增殖,形成纤维膜并且收缩?为观察PVR形成过程中炎性细胞增殖的特点和律,我们进行了实验研究,报道如下?

??1 材料与方?

??1?1 实验动物与分组:Wistar大白?49只,体重200?g±20?g,雌雄兼备,鼠龄相近。由白求恩医科大学动物部提供。随机分成正常对照和1?3?7?14?21?28?7组??

??1?2 PVR动物模型制作:取每只大鼠左眼为模型制备眼,右眼保留??3%戊巴比妥0.1??mg/kg腹腔麻醉。在无菌条件下,颞上方剪?角巩膜缘处球结膜,距角巩膜缘3?4?mm分a?1?2厚巩膜瓣,于剥a的巩膜瓣下方距a角巩膜缘?2?mm处准确地向玻璃体腔中心部注入鼠自身抗凝血20?μl。再于巩膜缘后2?mm处,穿刺巩膜?1.5?mm,刺入深度为2.0?mm,结膜瓣覆盖,结膜囊内涂入抗生素眼膏?

??1?3 标本制夓:分别于术后1?3?7?14?21?28天将模型眼和对照组眼球摘除,固定包埋,4?μm切片,HE染色,光镜察标本的玻璃体?覹网膜各层结构和细胞增殖情况?增生?核心抗?(Proliferatinf cell nuclear antigen PCNA)免疫组化染色,定量分析炎性细胞增殖情况,其计数方法采用CIMA-400图像分析仪??

??1?4 统计学夐理:应用单因素E种比较程?(mt)处理。该程序来源于白求恩医大学应用基础研究?自编的统计学程序(DOSP)?

??2 结果

??2?1 HE染色光镜观察:对照组鼠眼玻璃体均质,视网膜各层细胞结构清晰??1天组玻璃体内充满注入的红细胞,覹网膜表面有少量白细胞出现,主要表现为大量纤维蛋白渗出?3天组见注入的红细胞形态尚完整,有大量浆液性和纤维素?渗出?玻璃体内可见较多量的中性粒细胞,且见一模型眼覹网膜神经上皮层与色素上皮层脱离??7天组炎症反应?严重,玻璃体内红细胞裂解,@炎?细胞取代?炎性细胞以中?粒细胞为主,单核细胞数量开始增加,并出现成纤维细胞。覹网膜脱a3只眼(42.8%),脱离的视网膜组织结构不清??14天组中?粒细胞明显减少,单核细胞?淋巴细胞增加,成纤维细胞增殖,形成胶原?21天组见单核细胞?成纤维细胞大量增殖,胶原增加形成瘢痕?覹网膜大部分脱离,视网膜各层结构@纤维结缔组织取代。玻璃体腔及视网膜表面可见较多含铁血红素的巨噬细胞??28天组眼球萎缩变小,玻璃体腔内成纤维细胞过度增殖形成纤维化,覹网膜破损,结构不清??

??2?2 PCNA免疫组化定量分析:应用DOSP统计学程序行对照组与各组间比?(Dunnett?)和各处理组之间比?(Newman-keu/s?)。结果表明,手术?1天,玻璃体覹网膜炎?细胞增殖就?始??3天炎性细胞增殖明显,术后7天达高峰。以后炎性细胞增殖?度减慢,?以纤维胶原组织增殖为主(P?0.01)?术?21天的增殖速度与术?1天相近(P?0.05)?术?28天,已无与模型制作有关的炎?细胞增殖发生??

??3 讨论

??3?1 PVR发生在裎孔源性覹网膜脱a,覹网膜复位手术后或眼A伤等情况下?手术后PVR的形成主要危险因素包括术前PVR的存在或脉络膜脱离,玻璃体切割术的应用或大面积的视网膜冷??1?。从本质上讲,PVR的形成过程是组织对损伤的?种修复反应?发生在人体其他部位的创伤修复覠经历炎症充填、细胞增殖和组织塑形3个阶段?Hui等亦将PVR的形成分为炎症?细胞增殖和纤维化瘢?3个时??2?。由于眼组织损伤的特殊?,玻璃体?覹网膜的解剖学完整性和?-视网膜屏障功能的破坏,使RPE细胞暴露于玻璃体,并与其接触。研究表明,PVR中的绝大部分细胞都是RPE细胞或覹网膜胶质细胞转化而来,RPE和覹网膜胶质细胞能呈现出在覹网膜前膜中看到的?有细胞表??3?。本研究观察了大鼠眼玻璃体腔内注?及眼外伤的PVR动物模型中炎性细胞,成纤维细胞的增殖规律,为进一步探讨PVR形成机理,临床上药物防治PVR和?择玻璃体切割手术的?佳时机提供实验依据??

??3?2 细胞增殖在PVR形成中起主导作用,且是一个有明显时相特征的程序化过程。细胞游走?增殖?膜形成、增殖膜与覹网膜粘连并收缩构成对视网膜的牵拉,导致牵引?覹网膜脱a。按照创伤修复理论,伤后6?h创口边缘即可有炎性细胞出现?本实验结果显示?1天组可玻璃体腔内注入的红细胞和纤维蛋白的大量渗出,相当于创伤修复理论的纤维蛋白渗出期?模型制作后?3?14天为细胞侵入增殖、浸润的主覠阶段。早期主要是中?粒细胞,中后期为单核细胞和淋巴细胞,同时伴有纤维细胞增殖,有胶原形成,相当于创伤修复的细胞增殖期?在此期参与调节的主要是巨噬细胞释放的E种因子及这些因子诱发的局部免疫反??4?。并已在巨噬细胞诱发的PVR模型中证实了?IL-6等细胞因子的存在?5?。在模型制作14?28天,中?粒细胞、单核巨噬细胞?渐减少,成纤维细胞产生大量胶原,最终形成纤维膜,相当于创伤修夙的瘢痕形成期?

??3?3 本实验应用免疫组化方法,?测PCNA阳?的增殖细胞计数,使用CIMA?400图像分析系统得出时间-细胞增殖计数呈弓背单峰曲线,发现模型制作后7天增殖细胞数达最高峰?21天后基本不发生炎性细胞增殖?以纤维增殖为主,这与形态学观察结果?致?提示临床应用药物防治PVR时,控制PVR形成早期的炎性细胞增殖是必覠的??

??参?文献:

??1.Gowley M,Conway BP,Campochiaro PA,et al.Clinical risk factors for proliferative vitreoretinopathy.Arch Ophthalmol?1989?107? 1147

??2.Hui YN,Liang HC,Cai YS,et al.Corticosteroids and daunomycin in the prevention of expremental proliferative vitreoretinopathy induced by macrophages.Graefe’s Arch Clin Exp Ophthalmol?1993?231? 109

??3.Campochiaro PA.Pathogenic mechanisms in proliferative vitreoretinopathy.Arch ophthalmol?1997?115? 237

??4.黎晓新,黄洁.增殖性玻璃体视网膜病变组织中炎?细胞因子的?测.中华眼杂志?1998?34? 256

??5.石?宁,惠延年,杨琨,等.巨噬细胞诱发的实验性VR玻璃体中的IL-6.眼科研究,1998?16? 29

收60?1999?03?10

??修回?2000?05?09

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