免疫组化的原理

·抗原决定簇及抗体的生产
·抗原——抗体反应
·着色反应
·信号放大系统
·特异性

免疫组化染色步骤

1、石蜡切片二甲苯脱蜡至纯酒精。
2、3%过氧化氢10分钟。
3、梯度酒精入水。
4、PBS冲洗。
5、抗原修复。
6、一抗孵育，室温60分钟。
7、PBS冲洗。
8、Envision孵育30分钟。
9、PBS冲洗。
10、DAB显色（显微镜控制显色深浅）。
11、水洗，复染，脱水，透明，封固。

上皮类标记
·CAM 5.2
胞浆阳性着色，细丝状
包含CK8 和CK18，主要染色神经内分泌细胞和腺上皮，正常鳞状上皮阴性
用于染小细胞癌
用于胸腺瘤和梭形细胞癌
用于肝细胞癌：AE1/AE3 - CAM5.2 +
用于乳腺外的Paget’s病

上皮类标记
·CK34BE
胞浆阳性着色
鳞状上皮和结核性脑膜炎4阳性
用于染前列腺的基底层细胞，鉴别浸润癌
用于染涎腺肿瘤的肌上皮
用于染Mallory 小体

上皮类标记
·EMA
细胞膜/细胞浆阳性着色
上皮标记的替代品
浆细胞阳性，很好的内对照
用于染滑膜肉瘤 EMA +
用于大细胞分化不良性淋巴瘤 EMA +
用于L&H 富于淋巴细胞的结节状何杰金
用于脑膜瘤 EMA+ AE1/AE3 –
用于浆细胞瘤 常常 EMA +

上皮类标记
·CK7 和CK20
胞浆阳性着色
两者联合应用可鉴别很多种癌的原发部位
CK7 常常在胃肠道的癌为阴性
CK20 只有胃肠道癌和Merkel 细胞癌阳性

间皮细胞标记
·Calretinin
细胞核和细胞浆阳性着色，核阳性着色为必需
间皮强阳性，Sertoli和肥大细胞阳性
用于鉴别间皮瘤（+）和腺癌（-），常加CEA
用于鉴别梭形细胞间皮肉瘤（+）和其他的浆膜腔肉瘤（-）
用于鉴别胸、腹水中的癌细胞和间皮细胞
确定为间皮细胞，如大网膜内陷入的一团细胞或腺瘤样瘤
神经元分化标记，如中枢神经细胞瘤
帮助确诊心脏粘液瘤，几乎全为（+）

白细胞标记
·非何杰金淋巴瘤大致分类
CD20 （L26），CD3
怀疑T 细胞淋巴瘤者加UCHL-1（CD45RO）
怀疑浆细胞瘤者LCA（CD45RB）,CD79a, CD138
小B 细胞淋巴瘤者，CD79a, CD43（MT1）

白细胞标记
·LCA （CD45RB）
几乎所有的白细胞（+ ）
有些淋巴母细胞淋巴瘤、大细胞分化不良性淋巴瘤、外周T 细胞淋巴瘤（- ）
经典Hodgkin 的R-S 细胞（-）
以往浆细胞瘤（-），现（+）
HE 下明确的淋巴瘤不必要染LCA

B细胞相关标记
·CD20 （L26）
胞膜阳性着色，浆阳者不可判为阳性
各阶段B 细胞阳性，除了原始的前B 和非常成熟的浆母、浆细胞
用于染B 细胞淋巴瘤，除了小细胞、淋巴母细胞（不恒定）和浆细胞瘤（常-）
梭形细胞胸腺瘤（+）

B细胞相关标记
·CD79a
胞浆阳性着色，有/ 无核周聚集
全B 细胞标记，包括浆母和浆细胞
标记滤泡中心比mantle 和滤泡间B 要弱
比CD20 贵得多
用于鉴别淋巴母细胞淋巴瘤/ 白血病
弥漫性小B 细胞淋巴瘤/ 白血病
浆细胞瘤（常CD20 – 而CD79a >50% +

T细胞相关标记
·CD3 （polyclonal）
胞浆阳性着色，核周凝聚，有时高尔基体也阳性
极好的T 细胞标记，与CD43 不同，髓系细胞和组织细胞不着色
极好的T 细胞和NK 淋巴瘤标记，虽然有些大细胞型T 细胞淋巴瘤阴性

T细胞相关标记
·CD43 （MT1）
只有膜阳性才能判为阳性
T 细胞、T 细胞淋巴瘤、真性组织细胞肿瘤、粒细胞肉瘤阳性
一部分浆细胞瘤阳性
小B 细胞淋巴瘤阳性，这一特点可辅助表明增生的小淋巴细胞为肿瘤性！
EBV 感染的B 细胞阳性

T细胞相关标记
·UCHL-1（CD45RO）
细胞膜阳性着色，有时Golgi 阳性，弥漫性胞浆阳性者非真阳性
阳性：正常/ 反应性的T 细胞，组织细胞、粒细胞肉瘤和T 细胞淋巴瘤
罕见情况下B 细胞淋巴瘤阳性

T细胞相关标记
·CD5
细胞膜阳性着色
T 细胞阳性，但极少B 细胞也阳性
尤其用于慢性淋巴细胞性白血病和Mantle 淋巴瘤，而MALToma 和Marginal Zone 淋巴瘤阴性
用于鉴别胸腺癌（CD5+）和其他癌瘤

与激活相关的标记
·CD30 （Ki-I，Ber-H2）
只有膜染色和Golgi体染色才是真阳性
正常淋巴滤泡周单个的大细胞为阳性
激活的淋巴细胞阳性：如传单、弓浆虫感染、Kikuchi淋巴结炎等、浆细胞也阳性
用于大细胞分化不良性淋巴瘤
用于一些传统的大细胞淋巴瘤
外周T和B细胞淋巴瘤中的一些单个大细胞
经典何杰金病中的R-S细胞，但非L&H细胞
淋巴瘤样丘疹病等皮下CD30+的淋巴增生疾病
一些浆细胞瘤
胚胎性癌

组织细胞标记
·CD68（PGM1）
胞浆内颗粒状阳性着色
较好的组织细胞和单核细胞（包括浆样单核细胞）及其肿瘤的标记
有些非组织细胞也可阳性，包括：肾小管、粒细胞肉瘤、恶黑、血管瘤样恶纤组等

髓系细胞标记
·Myeloperoxidase
胞浆 阳性着色，常呈颗粒状
髓系细胞及其肿瘤的高度特异且敏感的标记
奇怪的是在Kikuchi 淋巴结炎和狼疮性坏死性淋巴结炎中，其中的组织细胞myeloperoxidase 也为 阳性

与淋巴瘤相关的标记
·ALK-1(Anaplastic lymphoma kinase-1)
胞核+ 胞浆阳性着色
用于大细胞分化不良性淋巴瘤，不能证实ALK1+ 与良好预后有关
用于一种罕见的大B 细胞细胞瘤，ALK1 阳性而CD20 阴性，但IgA 阳性

与淋巴瘤相关的标记
·Bcl-2
在核周围区阳性着色
在正常淋巴结，生发中心阴性，但mantle 和滤泡间细胞强阳性
在滤泡性淋巴瘤， （>80% 病例 ） 生发中心强阳性，阴性不能排除滤泡性淋巴瘤
也用于鉴别单核样B 细胞增生（- ）和单核样B 细胞淋巴瘤（+ ）
有人用于诊断孤立性纤维性肿瘤

与淋巴瘤相关的标记
·Cyclin-D1
核阳性着色
主要用于Mantle 区淋巴瘤，几乎所有病例均为阳性，有些可能为弱阳性

与分化阶段相关的标记
·Tdt
细胞核阳性着色
不成熟的T 或B 淋巴细胞标记，前T/ 前B 细胞
用于诊断淋巴母细胞淋巴瘤/ 白血病
诊断胸腺瘤（富于不成熟的T 细胞）

肌原性标记
·Desmin
胞浆阳性着色
平滑肌/ 骨骼肌及其肿瘤的良好标记，肌纤维母细胞有时也阳性，但肌上皮阴性
一些间皮瘤阳性
desmoplastic small cell tumor

肌原性标记
·MSA（Muscle-specific actin）
胞浆阳性着色
极好的肌源性标记
用于
· 平滑肌、骨骼肌及其肿瘤
· 肌纤维母细胞及相关肿瘤（恶纤组、结节性筋膜炎等）
· 肌上皮及其肿瘤
· 血管周细胞肿瘤
· 一些间皮瘤

血管原性标记
·CD31
细胞膜阳性着色
内皮细胞、巨核系细胞/ 血小板阳性
有时浆细胞/ 浆细胞瘤阳性
主要用于诊断血管性肿瘤：特异且敏感
用于识别骨髓中不正常的巨核细胞
用于巨核细胞系白血病

血管原性标记
·CD34
细胞膜+/-细胞浆阳性着色
血管内皮/巨核细胞/血小板 +
很好的血管标记，但特异性差
多种肿瘤CD34阳性，包括：

CD34阳性的肿瘤
·a) Some myeloid leukemias (especially the primitive ones).
·b) Vascular tumors
·c) Solitary fibrous tumor; angiomyofibroblastoma
·d) Hemangiopericytoma
·e) Dermatofibrosarcoma protuberans
·f) Gastrointestinal stromal tumor
·g) Mammary myofibroblastoma
·h) Epithelioid sarcoma
·i) Spindle cell lipoma
·j) Scattered cells in peripheral nerve sheath tumors
·k) Megakaryoblastic leukemia

血管原性标记
·Factor VIII related antigen (F-VIII)
胞浆 阳性着色，常为颗粒状
内皮细胞、巨核系细胞/ 血小板阳性
主要用于血管原性肿瘤
特异性好，敏感性差

神经、神经内分泌及神经外胚层
·Syn
细胞浆阳性着色
是神经和神经内分泌细胞很好的标记
特异性和敏感性均好

·Paraganglioma
·Pheochromocytoma
·Neuroblastoma
·Olfactory neuroblastoma
·Ganglioneuroma
·Ganglioneuroblastoma
·PNET
·Parathyroid tumor
·Medullary thyroid carcinoma
·Islet cell tumor
·Pituitary tumor
·Carcinoid tumor
·Small cell carcinoma
·Merkel cell carcinoma
·Thyroid follicular cell tumor
Adrenocortical tumor

神经、神经内分泌及神经外胚层
·CgA
胞浆内颗粒状着色
染神经内分泌细胞的分泌小泡，因此神经元和神经节细胞阴性
神经内分泌非常特异性指标，敏感性较差，阳性信号取决于瘤细胞内神经内分泌颗粒的多少
小细胞癌：信号少
类癌、Merkel细胞癌、甲状旁腺腺瘤等强阳性
神经性肿瘤可阳可阴

神经、神经内分泌及神经外胚层
·GFAP （Glial fibrillary acidic protein ）
胞浆阳性着色着色
星形细胞、室管膜细胞阳性，一些肌上皮阳性
星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、室管膜瘤和脉络丛乳头状瘤阳性，少突胶质细胞瘤常阴性；一些外周神经鞘瘤可阳性
涎腺多形性腺瘤常可阳性
乳腺的肌上皮有时也可阳性

神经、神经内分泌及神经外胚层
·S-100
细胞核+/-细胞浆阳性着色，核阳性着色为必需
用处非常多：
· glial cells, Schwann cells (astrocytoma, schwannoma, neurofibroma, malignant peripheral nerve sheath tumor). In benign nerve sheath tumors, almost all the tumor cells are positive; while in malignant peripheral nerve sheath tumor, usually only a fraction of the neoplastic cells are S100 positive. Note that S-100 protein antibody can also highlight the sustentacular cells that envelope the islands of tumor cells in paraganglioma and olfactory neuroblastoma.
S-100
· Melanocytes and nevus cells (Melanocytic nevus, malignant melanoma, malignant melanoma of soft parts/clear cell sarcoma of tendons and aponeurosis)
· Myoepithelial cells
· Fat cells (Lipoma, liposarcoma)
· Cartilage cells (Chondroma, chondroblastoma, chondrosarcoma
· Histiocytes of sinus histiocytosis with massive lymphadenopathy (Rosai-Dorfman disease)
· Interdigitating dendritic cells and Langerhans cells (Langerhans cell histiocytosis, interdigitating dendritic cell sarcoma). Juvenile CML is often S-100 positive

神经、神经内分泌及神经外胚层
·HMB45
胞浆内颗粒状着色
恶性心房扑动2和交界痣，而正常的痣细胞常为阴性
肾和肝的血管平滑肌脂肪瘤、肾被膜瘤
肺的淋巴管肌瘤病、糖瘤

神经、神经内分泌及神经外胚层
·Melan-A
胞浆内颗粒状着色
阳性表达的细胞包括：黑色素细胞、肾上腺皮质、性索（Leydig, granulosa）
用于：
· 心房扑动2
· 支持- 间质细胞瘤和颗粒细胞瘤
· 血管周细胞瘤
· 肾上腺皮质肿瘤

 ·P53
细胞核阳性着色
正常细胞因P53蛋白很快降解故阴性，而恶性肿瘤中因突变或存在使P53稳定的因素，故可阳性
·C-erBb2
细胞膜阳性着色
分级
Herceptine 治疗
还用于鉴别乳腺内/外的Paget’s病和恶黑
用于乳腺内/外Paget’s病和表皮的一些透明细胞（Toker cell）
用于显示Paget’s病切缘是否干净

 
   其他抗体
·CEA
细胞膜+/- 细胞浆阳性着色
几乎所有的腺癌为阳性
用于诊断乳腺/ 乳腺外的Paget’s 病，+ 而恶黑-
显示涎腺或汗腺肿瘤中的腺体成分
用于鉴别腺癌和间皮瘤
用于诊断甲状腺髓样癌，尤其是小细胞型
用于诊断肝细胞癌